多發性骨髓瘤占所有腫瘤的1%，是世界第二大血液腫瘤，其全球發病率高達1.78/10萬人、我國骨髓瘤患者的五年生存率約為24.8%，日本為33.3%，而美國則是46.7% [1]，并且骨髓瘤的治愈率極低，復發率高達28%，因此，發展高效靈敏的檢測方法對于多發性骨髓瘤的治療和預后具有重要意義。

圖1.多發性骨髓瘤全球發病率[1]

臨床上目前常用微小殘留病灶（MRD）來對多發性骨髓瘤的發展進行評價。微小殘留病灶（MRD）對于評估多發性骨髓瘤的緩解程度至關重要，多項研究已經證明，達到MRD陰性與生存結局改善相關，并且可以作為無進展生存（PFS）和總生存（OS）的替代治療終點，但MRD評估的最佳時機仍有待確定。檢測MRD的常用技術有下一代流式細胞術(NGF)，二代測序(NGS)、正電子發射斷層顯像-X線計算機體層成像/核磁共振成像(PET-CT/MRI)以及質譜檢測-M蛋白。其中，NGS作為新興的MRD檢測方法, 可以一次性檢測多種腫瘤相關的基因突變（NGS-panel）負荷的變化，同時可以綜合評估腫瘤亞克隆、新發克隆以及克隆性造血的因素，但普通NGS 技術的靈敏度只有2% 左右，導致其準確性稍顯不足。而NGF 技術克服了傳統檢測技術靈敏性較低和缺乏統一標準的缺點,具有適用性廣，檢測迅速、簡便等優點，但由于NGF儀器數據產出較大，對于計算機設備要求較高；同時實驗流程的操作過程以及數據解讀很大程度上依賴于技術員的專業水平；其對樣本的質量和數量要求較高等條件限制了該技術在臨床檢驗中的推廣應用。而PET-CT/MRI等影像學檢測技術雖然可以一次評估全身的腫瘤殘留情況，對于及時發現腫瘤遠處轉移具有較大的優勢。但仍然存在敏感性偏低的缺陷。基于上述技術的優劣，質譜檢測M蛋白以其快速，精準，高靈敏度的技術優點越來越多的在臨床上推廣使用。M蛋白是單克隆增殖的漿細胞及其分泌的單克隆球蛋白，是多發性骨髓瘤復雜臨床表現的主要作用分子。然而，在這兩項重要的多發性骨髓瘤檢測指標中，常常發現骨髓瘤患者MRD陰性，但血清M蛋白仍然為陽性（骨髓瘤治療完全反應的定義是，強化治療后血液中M蛋白完全被清除）。因此， M蛋白的定量檢測對于診斷多發性骨髓瘤具有重要臨床意義[2]。

圖2.MRD檢測的重要性。通過對比MRD檢測前后對于治療和預后復發的對比證明MRD檢測的重要性。

目前測定M蛋白常用的方法有血清蛋白電泳(SPEP)和免疫固定電泳(IFE)技術。血清蛋白電泳在臨床實驗中被廣泛應用于檢測樣本中的非正常蛋白質。血清蛋白電泳可以用來檢測M蛋白，但是對于α₂區或β區急性時反應蛋白或脂蛋白增高引起的峰型和M峰，比如多數腎病、腎小球腎炎患者α₂區或β區多出現高尖的峰，血清蛋白電泳不能直接認定其為M蛋白，需要通過免疫固定電泳做進一步的確認。免疫固定電泳(IFE)技術是區帶電泳技術與特異性抗血清的免疫沉淀反應相結合的一種免疫學分析方法，是臨床鑒定M蛋白最常用的方法。免疫固定電泳在快速分離鑒別M蛋白方面有顯著優勢，且可對M蛋白進行分型，相比于骨髓細胞形態學檢查和血清蛋白電泳具有更快速簡單，更準確的特點。然而，上述兩種方法在取樣、檢測和精確度以及對于人員素質的要求方面都較高，很難適應如今需要快速精準診斷的臨床要求。此外，M蛋白序列具有個體異性，因而只有通過蛋白測序獲得其序列，才能實現真正的個性化監測，而上述兩種方法均無法獲得蛋白序列信息。

圖3. 血清蛋白電泳(SPEP)和免疫固定電泳(IFE)技術[3]

針對M蛋白臨床快速準確檢測存在的問題，上海快序生物在《基于質譜技術的。同時，結合其在蛋白質檢測領域多年的技術積累發展了EasyM多發性骨髓瘤血檢技術。

EasyM多發性骨髓瘤血檢分為M蛋白測序和個性化監測兩個階段。

第一階段：采用蛋白質質譜對診斷期MM患者血清中的M蛋白進行測序，僅需100微升，便可以在上海快序的蛋白測序平臺上確定M蛋白的氨基酸全長序列。

第二步：個性化監測，在完成第一步獲得了患者個體特異性的M蛋白序列信息后，快序生物便可以通過靶向蛋白質組學的方法，可對病程各個階段的患者的血清M蛋白進行精準定量，追蹤其濃度變化，實現對病情的監測。

圖4.EasyM第一步：M蛋白測序；第二步：個性化監測

該技術具有高靈敏度、非侵入性和個性化三大優勢。

高靈敏度：EasyM比現有臨床使用的血檢方法SPEP和IFE的靈敏度提高了200-1000倍，可提前半年左右發現骨髓瘤的復發，并避免了骨髓穿刺采樣位置偏差所造成的假陰性。在2021年9月發表于癌癥研究頂級期刊《CLINICAL CANCER RESEARCH》的一篇題為《A Personalized Mass Spectrometry–Based Assay to Monitor M-Protein in Patients with Multiple Myeloma (EasyM)》的研究性文章中，研究人員使用EasyM對參與 MCRN-001 臨床試驗的 26 名患者體內的M蛋白進行了檢測，結果表明與血清蛋白電泳和免疫固定電泳相比，EasyM 將患者體內M蛋白的檢測靈敏度（檢測 0.58 mg/L 的 M 蛋白）分別提高了1,000 倍和 200 倍，再次證明EasyM 這種無創、靈敏的檢測方法，與其他檢測方法相比具有卓越的性能，未來有望成為多發性骨髓瘤監測和復發預測的理想選擇[5]。

非侵入性：此外，骨髓穿刺的檢測方法不方便頻繁采樣，且造成病人的痛苦，EasyM采用無創血液取樣，便于常規檢測，只需要50-100微升的血液，便可根據需要隨時監測疾病狀態。在2021年7月發表于蛋白組學研究知名期刊《Journal of Proteome Research》的一篇題為《Mass Spectrometry Provides a Highly Sensitive NoninvasiveMeans of Sequencing and Tracking M-Protein in the Blood of Multiple MyelomaPatients》的研究性文章中，研究人員使用EasyM對12個樣本血清進行了M蛋白檢測。結果表明與常規的ctDNA檢測相比，EasyM所需的血清量僅為 50 μL，所需樣本量較少，這極大提高了多發性骨髓瘤患者的非侵入性檢測的準確性和無創性[6]。

個性化：最后，EasyM檢測追蹤患者個體特異性的M蛋白，因此每項檢測都針對患者量身定制，無樣本偏差，實現真正個性化精準醫學。

通過EasyM多發性骨髓瘤血檢技術，上海快序生物在3-5天內即可完成個性化監測，2-3周完成精確診斷。為多發性骨髓瘤患者下一步精準治療方案制定提供了參考，保障了患者的生命健康。

快序生物的蛋白從頭測序技術深度融合了質譜技術以及計算機AI算法，依托其先進的抗體測序技術，以多發性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)的微小殘留病變(Minimal Residual Disease, MRD)檢測為突破口，積極推動國內臨床蛋白質譜技術的發展，并致力于推動多發性骨髓瘤目前臨床檢測技術方法的持續升級，以期讓每一位臨床患者都能從快序生物的技術升級中獲益。

參考文獻：

[1]https://www.thelancet.com/journals/lanhae/article/PIIS23523026(22)00165-X/fulltext

[2]Marion  al.Early achievement of measurable residual disease negativity in the treatment of multiple myeloma as predictor of outcome.Br J Haematol . 2022 Mar 11. doi: 10.1111/bjh.18103.

 [3] Jung D, Jain P, Yao Y, Wang M. Advances in the assessment of minimal residual disease in mantle cell lymphoma. J Hematol Oncol. 2020 Sep 24;13(1):127. doi: 10.1186/s13045-020-00961-8.

[4] Liu GY, Tang O, Brotman DJ, Miller ER 3rd, Moliterno AR, Juraschek SP. Gamma gap thresholds and HIV, hepatitis C, and monoclonal gammopathy. PLoS One. 2020 Jan 15;15(1):e0224977.

[5].Liyasova M, McDonald Z,Taylor P, et al. A personalized mass spectrometry-based assay to monitorM-protein in multiple myeloma patients (EasyM)[J]. Clinical Cancer Research,2021.