多發(fā)性骨髓瘤占所有腫瘤的1%，是世界第二大血液腫瘤，其全球發(fā)病率高達1.78/10萬人、我國骨髓瘤患者的五年生存率約為24.8%，日本為33.3%，而美國則是46.7% [1]，并且骨髓瘤的治愈率極低，復(fù)發(fā)率高達28%，因此，發(fā)展高效靈敏的檢測方法對于多發(fā)性骨髓瘤的治療和預(yù)后具有重要意義。

圖1.多發(fā)性骨髓瘤全球發(fā)病率[1]

臨床上目前常用微小殘留病灶（MRD）來對多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)展進行評價。微小殘留病灶（MRD）對于評估多發(fā)性骨髓瘤的緩解程度至關(guān)重要，多項研究已經(jīng)證明，達到MRD陰性與生存結(jié)局改善相關(guān)，并且可以作為無進展生存（PFS）和總生存（OS）的替代治療終點，但MRD評估的最佳時機仍有待確定。檢測MRD的常用技術(shù)有下一代流式細胞術(shù)(NGF)，二代測序(NGS)、正電子發(fā)射斷層顯像-X線計算機體層成像/核磁共振成像(PET-CT/MRI)以及質(zhì)譜檢測-M蛋白。其中，NGS作為新興的MRD檢測方法, 可以一次性檢測多種腫瘤相關(guān)的基因突變（NGS-panel）負荷的變化，同時可以綜合評估腫瘤亞克隆、新發(fā)克隆以及克隆性造血的因素，但普通NGS 技術(shù)的靈敏度只有2% 左右，導(dǎo)致其準(zhǔn)確性稍顯不足。而NGF 技術(shù)克服了傳統(tǒng)檢測技術(shù)靈敏性較低和缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的缺點,具有適用性廣，檢測迅速、簡便等優(yōu)點，但由于NGF儀器數(shù)據(jù)產(chǎn)出較大，對于計算機設(shè)備要求較高；同時實驗流程的操作過程以及數(shù)據(jù)解讀很大程度上依賴于技術(shù)員的專業(yè)水平；其對樣本的質(zhì)量和數(shù)量要求較高等條件限制了該技術(shù)在臨床檢驗中的推廣應(yīng)用。而PET-CT/MRI等影像學(xué)檢測技術(shù)雖然可以一次評估全身的腫瘤殘留情況，對于及時發(fā)現(xiàn)腫瘤遠處轉(zhuǎn)移具有較大的優(yōu)勢。但仍然存在敏感性偏低的缺陷。基于上述技術(shù)的優(yōu)劣，質(zhì)譜檢測M蛋白以其快速，精準(zhǔn)，高靈敏度的技術(shù)優(yōu)點越來越多的在臨床上推廣使用。M蛋白是單克隆增殖的漿細胞及其分泌的單克隆球蛋白，是多發(fā)性骨髓瘤復(fù)雜臨床表現(xiàn)的主要作用分子。然而，在這兩項重要的多發(fā)性骨髓瘤檢測指標(biāo)中，常常發(fā)現(xiàn)骨髓瘤患者MRD陰性，但血清M蛋白仍然為陽性（骨髓瘤治療完全反應(yīng)的定義是，強化治療后血液中M蛋白完全被清除）。因此， M蛋白的定量檢測對于診斷多發(fā)性骨髓瘤具有重要臨床意義[2]。

圖2.MRD檢測的重要性。通過對比MRD檢測前后對于治療和預(yù)后復(fù)發(fā)的對比證明MRD檢測的重要性。

目前測定M蛋白常用的方法有血清蛋白電泳(SPEP)和免疫固定電泳(IFE)技術(shù)。血清蛋白電泳在臨床實驗中被廣泛應(yīng)用于檢測樣本中的非正常蛋白質(zhì)。血清蛋白電泳可以用來檢測M蛋白，但是對于α₂區(qū)或β區(qū)急性時反應(yīng)蛋白或脂蛋白增高引起的峰型和M峰，比如多數(shù)腎病、腎小球腎炎患者α₂區(qū)或β區(qū)多出現(xiàn)高尖的峰，血清蛋白電泳不能直接認定其為M蛋白，需要通過免疫固定電泳做進一步的確認。免疫固定電泳(IFE)技術(shù)是區(qū)帶電泳技術(shù)與特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合的一種免疫學(xué)分析方法，是臨床鑒定M蛋白最常用的方法。免疫固定電泳在快速分離鑒別M蛋白方面有顯著優(yōu)勢，且可對M蛋白進行分型，相比于骨髓細胞形態(tài)學(xué)檢查和血清蛋白電泳具有更快速簡單，更準(zhǔn)確的特點。然而，上述兩種方法在取樣、檢測和精確度以及對于人員素質(zhì)的要求方面都較高，很難適應(yīng)如今需要快速精準(zhǔn)診斷的臨床要求。此外，M蛋白序列具有個體異性，因而只有通過蛋白測序獲得其序列，才能實現(xiàn)真正的個性化監(jiān)測，而上述兩種方法均無法獲得蛋白序列信息。

圖3. 血清蛋白電泳(SPEP)和免疫固定電泳(IFE)技術(shù)[3]

針對M蛋白臨床快速準(zhǔn)確檢測存在的問題，上海快序生物在《基于質(zhì)譜技術(shù)的。同時，結(jié)合其在蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域多年的技術(shù)積累發(fā)展了EasyM多發(fā)性骨髓瘤血檢技術(shù)。

EasyM多發(fā)性骨髓瘤血檢分為M蛋白測序和個性化監(jiān)測兩個階段。

第一階段：采用蛋白質(zhì)質(zhì)譜對診斷期MM患者血清中的M蛋白進行測序，僅需100微升，便可以在上海快序的蛋白測序平臺上確定M蛋白的氨基酸全長序列。

第二步：個性化監(jiān)測，在完成第一步獲得了患者個體特異性的M蛋白序列信息后，快序生物便可以通過靶向蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，可對病程各個階段的患者的血清M蛋白進行精準(zhǔn)定量，追蹤其濃度變化，實現(xiàn)對病情的監(jiān)測。

圖4.EasyM第一步：M蛋白測序；第二步：個性化監(jiān)測

該技術(shù)具有高靈敏度、非侵入性和個性化三大優(yōu)勢。

高靈敏度：EasyM比現(xiàn)有臨床使用的血檢方法SPEP和IFE的靈敏度提高了200-1000倍，可提前半年左右發(fā)現(xiàn)骨髓瘤的復(fù)發(fā)，并避免了骨髓穿刺采樣位置偏差所造成的假陰性。在2021年9月發(fā)表于癌癥研究頂級期刊《CLINICAL CANCER RESEARCH》的一篇題為《A Personalized Mass Spectrometry–Based Assay to Monitor M-Protein in Patients with Multiple Myeloma (EasyM)》的研究性文章中，研究人員使用EasyM對參與 MCRN-001 臨床試驗的 26 名患者體內(nèi)的M蛋白進行了檢測，結(jié)果表明與血清蛋白電泳和免疫固定電泳相比，EasyM 將患者體內(nèi)M蛋白的檢測靈敏度（檢測 0.58 mg/L 的 M 蛋白）分別提高了1,000 倍和 200 倍，再次證明EasyM 這種無創(chuàng)、靈敏的檢測方法，與其他檢測方法相比具有卓越的性能，未來有望成為多發(fā)性骨髓瘤監(jiān)測和復(fù)發(fā)預(yù)測的理想選擇[5]。

非侵入性：此外，骨髓穿刺的檢測方法不方便頻繁采樣，且造成病人的痛苦，EasyM采用無創(chuàng)血液取樣，便于常規(guī)檢測，只需要50-100微升的血液，便可根據(jù)需要隨時監(jiān)測疾病狀態(tài)。在2021年7月發(fā)表于蛋白組學(xué)研究知名期刊《Journal of Proteome Research》的一篇題為《Mass Spectrometry Provides a Highly Sensitive NoninvasiveMeans of Sequencing and Tracking M-Protein in the Blood of Multiple MyelomaPatients》的研究性文章中，研究人員使用EasyM對12個樣本血清進行了M蛋白檢測。結(jié)果表明與常規(guī)的ctDNA檢測相比，EasyM所需的血清量僅為 50 μL，所需樣本量較少，這極大提高了多發(fā)性骨髓瘤患者的非侵入性檢測的準(zhǔn)確性和無創(chuàng)性[6]。

個性化：最后，EasyM檢測追蹤患者個體特異性的M蛋白，因此每項檢測都針對患者量身定制，無樣本偏差，實現(xiàn)真正個性化精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)。

通過EasyM多發(fā)性骨髓瘤血檢技術(shù)，上海快序生物在3-5天內(nèi)即可完成個性化監(jiān)測，2-3周完成精確診斷。為多發(fā)性骨髓瘤患者下一步精準(zhǔn)治療方案制定提供了參考，保障了患者的生命健康。

快序生物的蛋白從頭測序技術(shù)深度融合了質(zhì)譜技術(shù)以及計算機AI算法，依托其先進的抗體測序技術(shù)，以多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)的微小殘留病變(Minimal Residual Disease, MRD)檢測為突破口，積極推動國內(nèi)臨床蛋白質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，并致力于推動多發(fā)性骨髓瘤目前臨床檢測技術(shù)方法的持續(xù)升級，以期讓每一位臨床患者都能從快序生物的技術(shù)升級中獲益。

參考文獻：

[1]https://www.thelancet.com/journals/lanhae/article/PIIS23523026(22)00165-X/fulltext

[2]Marion  al.Early achievement of measurable residual disease negativity in the treatment of multiple myeloma as predictor of outcome.Br J Haematol . 2022 Mar 11. doi: 10.1111/bjh.18103.

 [3] Jung D, Jain P, Yao Y, Wang M. Advances in the assessment of minimal residual disease in mantle cell lymphoma. J Hematol Oncol. 2020 Sep 24;13(1):127. doi: 10.1186/s13045-020-00961-8.

[4] Liu GY, Tang O, Brotman DJ, Miller ER 3rd, Moliterno AR, Juraschek SP. Gamma gap thresholds and HIV, hepatitis C, and monoclonal gammopathy. PLoS One. 2020 Jan 15;15(1):e0224977.

[5].Liyasova M, McDonald Z,Taylor P, et al. A personalized mass spectrometry-based assay to monitorM-protein in multiple myeloma patients (EasyM)[J]. Clinical Cancer Research,2021.